01
抗人球蛋白实验的发现
～年间，在剑桥大学病理实验室工作的动物免疫学家Coombs对不完全抗体的性质发生了兴趣。他用显微镜观察悬浮在盐水介质中用完全和不完全抗体致敏的红细胞在电场内的游走现象,并用未致敏的细胞作对照。他发现用完全和不完全抗体致敏细胞的游走速度相近,与未致敏细胞区别很大。年7月以后,Coombs提出了抗人球蛋白试验的原理。Coombs声称他那时正待在一列偶然发生故障的从伦敦到剑桥的战时列车里,由于之前他看到了Ehriich关于侧链理论的论文以及所推测红细胞和抗体的一些特点。Coombs想象包围在细胞上的不完全抗体分子是球蛋白,但细胞仍然是可以自由漂浮的,要使它们连接在一起必须加入另一个抗体分子,那就是抗人球蛋白抗体。
Coombs的思想成为实际实验的基础，他阐述了直接和间接抗人球蛋白试验原理。其实这些原理早在年就被意大利医师Moreschi提出并证实,但他的工作很少为人所知,也没有被收入一般的免疫技术文集。当Coombs完成了抗人球蛋白试验的大部分研究工作后,才发现抗人球蛋白实验的先驱者Moreschi被束之高阁的论文,但那时Moreschi早巳去世多年。
为了证实Coombs的理论,Coombs本人、Race、Mourant和技术员们深入细致地进行了许多周的工作。首先是要获得一个针对人体球蛋白的抗血清,很幸运的是病理室的隔壁生理学实验室供给了许多家兔免疫血清,它们分别针对人的球蛋白和全血清。用未致敏的人AB型Rh(+)细胞分别吸收这些抗血清,直到不再凝集吸收细胞为止。当初最关键的实验和其他的大多数实验是用抗人球蛋白血清做的。
被不完全抗D致敏的Rh(+)细胞用盐水洗涤3次后,在盐水悬液中不凝集,可是加入适当吸收和稀释的抗人球蛋白血清后,发生凝集,凝集效价为64或更高。使用不同来源的不完全抗D血清,以及抗c和新发现的抗e血清进行试验,也得到类似结果。还发现某些与抗D血清弱凝集的D(+)细胞,与兔抗球蛋白血清混合后发生强凝集。
直接抗人球蛋白实验能检出在体内致敏的新生儿溶血病患儿细胞,具有诊断意义。对一个直接抗人球蛋白实验阳性、但又未表现出溶血病症状的新生儿的研究,导致发现Kell血型系统,年Coombs发表了脐血的抗人球蛋白实验,随后的工作是使用不同的人血清蛋白组份对抗人球蛋白进行抑制试验,结果证明致敏的抗体是γ球蛋白。现在已知”不完全“抗体为IgG,而"完全"抗体为IgM。
02
直接抗人球蛋白实验定义
直接抗人球蛋白实验用于检测在病人体内致敏红细胞的不完全抗体和/或补体。不完全抗体在体内与相应红细胞抗原结合(不完全抗体Fab段和抗原特异性结合)，该红细胞标本不出现肉眼可见的凝集反应，加入抗人球蛋白抗体，即抗-抗体后(不完全抗体Fc段和抗-抗体Fab段结合)，则出现凝集反应，在体内不完全抗体与红细胞相应抗原结合形成免疫复合物时，激活补体(补体C1结合抗体FC段)。如补体成分依次从C5至C9激活，则引起红细胞溶血。如补体成分只是从C1至C3激活，激活的C3结合红细胞膜上C3受体，C3可进一步激活为C3d等，红细胞膜上形成稳定的补体C3d-C3d受体复合物。此时红细胞标本加入抗补体抗体，可出现凝集反应。
毛细管和免疫色谱条03
直接抗人球蛋白实验主要临床应用
直接抗人球蛋白实验在临床上主要应用于：胎母血型不合新生儿溶血病(HDN)的诊断、免疫溶血性输血反应(IHTR)检测、自身免疫溶血性贫血(AIHA)检测和药物导致的免疫溶血性贫血等。
1.胎母血型不合新生儿溶血病检测
脐带血红细胞DAT阳性结果说明新生儿红细胞表面有IgG抗体，既母体的IgG抗体，已穿过胎盘并结合到胎儿红细胞上，胎儿(新生儿)红细胞存活期缩短或红细胞破坏而溶血。在胎儿体内致敏红细胞抗体可以由放散试验解离至放散液中，进一步检测其特异性。
2.免疫溶血性输血反应检测
DAT结果有助于对抗体介导的溶血性输血反应的辅助诊断。对病人(受血者)红细胞DAT检测阳性，可以说明在病人血液中输入的红细胞被抗体致敏，该抗体是病人被输入的红细胞免疫后产生的。在病人血液中输入的红细胞被抗体致敏后生存期缩短，或直接被破坏而溶血。病人血液中补体，无论是否激活都与IgG分子同时附着于输入的红细胞膜上。对病人在输血后采集的血液标本，DAT试验可检测出IgG或C3，或同时检测出IgG+C3。
在采集病人标本前，病人体内可能已发生了不同程度的溶血，即输入的红细胞中，有一些已被破坏，并从病人血液循环中被排除；或者在病人的循环血液中输入红细胞非常少，DAT检测都可能是阴性结果。但仅凭DAT阴性结果这一项指标仍不能排除溶血性输血反应。
3.自身免疫溶血性贫血检测
红细胞DAT检测有助于对疑似自身免疫溶血性贫血(AIHA)病人的诊断。AIHA病人产生针对自身红细胞的抗体，这些抗体同激活的补体一起，或只是补体结合到循环血液中自身红细胞膜上，包括抗体和补体共同结合了红细胞，但是抗体又从红细胞解离，补体在这些情况都损伤红细胞膜，红细胞直接溶血或存活期缩短。有研究统计，绝大部分AIHA病例，约70%相关抗体是温抗体，AIHA病人中67%同时存在IgG抗体和补体，20%只存在IgG抗体，13%只存在补体。另有约18%AIHA病人血液中是冷反应抗体，这些病人包括冷凝集综合症(CAS)病人和阵发性血红蛋白尿症(PCH)病人。对CAS和PCH病人红细胞DAT检测结果一般只是抗补体阳性。
4.药物导致的溶血性贫血检测
直接抗人球蛋白实验有助于对一些药物导致的溶血性贫血疾病的诊断。因为不同的药物和不同的免疫病理机制，DAT试验结果可能是抗-IgG+C3阳性，也可能只是抗-IgG阳性或抗-C3阳性。
5.其他用途等
?维生素D诱导的溶血性贫血
?给予外源性免疫球蛋白
?最近的造血干细胞移植
?最近的实体器官移植
?系统性红斑狼疮
?传染性单核细胞增多症
?一些血液病，包括淋巴增生性疾病，有溶血症状DAT阴性
?微血管病性溶血性贫血(血栓性血小板减少性紫癜，DIC)
?脾机能亢进
?肝脏疾病
?血红蛋白病(镰状细胞病、地中海贫血)
?球形细胞增多症
?红细胞酶缺乏(G-6-PD缺乏，丙酮酸激酶缺乏)
?感染性疾病(难辨梭菌感染)
?红血球损伤(机械心脏瓣膜，血液加热器使用不当)
上述部分内容来源：
李凌波,陈维佳主编.血液免疫学血型相容性实验指南[M].长春：吉林大学出版社,.
大厦之成，非一木之材也;大海之润，非一流之归也。预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇